北京基因表达荧光定量PCR分析服务 欢迎咨询 上海朝瑞生物科技供应

来源: 网络整理 2020-02-14

一个评估 PCR 效率的关键参数是 R2,它是说明如何使用一个数值预测另一个数值的相关程度的统计学术语。如果 R2 为 1,那么 Y 值 (Ct) 可以用来准确预测 X 值(图7A)。如果 R2 为 0,那么就不能通过 Y 值预测 X 值(图 7B)。R2 值 >0.99 表示两个数值之间相关的置信度良好。

精确度

标准差(偏差的平方根)是最常用的精确度计量方法。如果许多数据点都靠近平均值,则标准差就小;如果许多数据点都远离平均值,则标准差就大。

实际上,足够多重复次数产生的数据集会形成大致的正态分布。这经常可通过经典的中心极限定理来证明,该定理称大量独立同分布随机变量的和在无限多时趋向于正态分布,北京基因表达荧光定量PCR分析服务,北京基因表达荧光定量PCR分析服务。如图 8A 所示,北京基因表达荧光定量PCR分析服务,约 68% 的值在平均值的 1 个标准差之内,约 95% 的值在平均值的 2 个标准差之内,约 99.7% 的值在平均值的 3 个标准差之内。

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实时荧光定量PCR的应用

目前,qPCR技术已经广泛应用于生物医药食品等行业,应用于疾病的早期诊断、遗传病的早期诊断、***研究、肿瘤的诊断与研究、食品病原微生物的检测、转基因食品检测、动物疫病检测等,除此之外,还包括:

● 基因扩增

● 扩增特异性分析

● 基因定量分析

● 基因检测

● 基因分型

● SNP分析

● RFLP多态性分析

● 单/多基因表达研究

● 高通量基因表达谱研究

实时荧光定量PCR技术,顾名思义,就是在PCR的基础上加入荧光基团,通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程,***通过对未知模板进行定量分析的方法。

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混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟,取出后立即冰水浴至管内外温度一致,然后加逆转录酶0.5μl,37℃水浴60分钟。

  取出后立即95℃干浴3分钟,得到逆转录终溶液即为cDNA溶液,保存于-80℃待用。 管家基因(β-actin)实时定量PCR

  β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011,反应前取3μl按10倍稀释(加水27μl并充分混匀)为1010,依次稀释至109、108、107、106、105、104,以备用。

  反应体系如下:

  标准品反应体系 序号 反应物 剂量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 阳性模板上游引物F 0.5μl 3 阳性模板下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 阳性模板DNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 总体积 50μl 轻弹管底将溶液混合,6000rpm短暂离心。

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